产品编号：SR704
制品内容（25μl反应×50次量）
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2×Premix for PCR
*1 1
ml
Primer Mix for
Equine*2
50μl
dH2O
1 ml
Control DNA
for Equine 50μl
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*1 2×Premix
for PCR中含有dNTP、Buffer、Taq酶等。
*2 Primer Mix for Equine中含有扩增用引物。
保存：-20℃
制品说明
本制品是利用PCR技术快速检测马线粒体DNA的试剂盒。应用PCR技术，根据线粒体基因上动物种间的多态性的差异进行马源性成分鉴定。
利用特异性扩增马源性成分的引物对样品模板DNA进行PCR扩增,并分别在实验中设立阴性对照和阳性对照反应。制品中2×Premix for PCR
已经将DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTP等试剂预混在一起。试剂盒采用独特的PCR反应用Buffer和DNA聚合酶,可以有效抵制非特异性的PCR
扩增，大大提高了PCR的扩增效率。本检测简单快速，灵敏度高、特异性强。本制品适用于食品和饲料等样品中马源性成分的鉴别。
实验操作
A 样品DNA 提取：
1．取样：按采样要求，取8-10g原样品在灭菌研钵中。
2．研磨：加入适量TE溶液，充分研磨样品至微小颗粒状，转移至数个灭菌EP管中。
3．提取核酸：按市售的DNA核酸提取试剂盒的说明方法提取样品总DNA。
B PCR反应
按下列组份配置PCR反应液。
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2×Premix for PCR 18μl
Primer Mix for
Anatine 1μl
样品DNA * 5μl
dH2O up to 25μl
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* Negative Control 反应时，用dH2O替代样品DNA; Positive Control 反应时，用Control DNA for Equine替代样品DNA。
C 凝胶电泳检测试验：
将PCR扩增产物于1.5％琼脂糖凝胶上进行电泳试验。
按下列条件进行PCR反应:
94℃ 2 min 1 Cycle
94℃ 15 sec 40 Cycles
68℃ 30 sec 40 Cycles
72℃ 30 sec 40 Cycles
72℃ 5 min 1 Cycle
质量控制
以下条件有一条不满足时，实验视为无效：
a) 空白对照：无PCR扩增产物条带。
b) 阴性对照：在226bp大小处未见PCR扩增条带。
c) 阳性对照：在226bp大小处可见PCR扩增条带。
结果判断与表述
A 结果判定
在符合质量控制的情况下，被检样品在226bp大小处可见PCR扩增条带则判为可疑阳性；在226bp大小处未见PCR扩增条带则判为阴性。
将可疑阳性的PCR扩增产物进行核酸序列测定，与马线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ基因相对应片段的序列比对，其片段大小正确，同源性
达到97%以上，则确证含有马成分。
B 结果表述
结果为阴性者，表述为“未检出马成分”。
结果为可疑阳性者，经测序确证含有马成分，表述为“检出马成分”；否则，表述为“未检出马成分”。
