产品编号：SR702

制品内容（25μl反应×50次量）

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2×Premix for PCR *1                     1 ml

Primer Mix for Chicken*2               50 μl

dH₂O                                             1 ml

Control DNA for Chicken                50 μl

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*1   2×Premix for PCR中含有dNTP、Buffer、Taq酶等。

*2   Primer Mix for Chicken中含有扩增用引物。

保存：-20℃

制品说明

本制品是利用PCR技术快速检测鸡线粒体DNA的试剂盒。应用PCR技术，根据线粒体基因上动物种间的多态性的
差异进行鸡源性成分鉴定。利用特异性扩增鸡源性成分的引物对样品模板DNA进行PCR扩增,并分别在实验中设
立阴性对照和阳性对照反应。制品中2×Premix for PCR已经将DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTP等试剂预混
在一起。试剂盒采用独特的PCR反应用Buffer和DNA聚合酶,可以有效抵制非特异性的PCR扩增，大大提高了PCR
的扩增效率。本检测简单快速，灵敏度高、特异性强。本制品适用于食品、化妆品和饲料等样品中鸡源性成
分的鉴别。

实验操作：

A  样品DNA 提取：

1．取样：按采样要求，取8-10g原样品在灭菌研钵中。

2．研磨：加入适量TE溶液，充分研磨样品至微小颗粒状，转移至数个灭菌EP管中。

3．提取核酸：按市售的DNA核酸提取试剂盒的说明方法提取样品总DNA。

B  PCR反应

按下列组份配置PCR反应液。

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2×Premix for PCR                      18μl

Primer Mix for Chicken               1μl

样品DNA  *                                     5μl

dH2O                                 up to 25μl

*  Negative Control 反应时，用dH2O替代样品DNA; Positive Control 反应时，用Control DNA for
Chicken替代样品DNA。

C  凝胶电泳检测试验：

将PCR扩增产物于1.5％琼脂糖凝胶上进行电泳试验。

按下列条件进行PCR反应:

    94℃                2  min       1 Cycle

   94℃               15  sec     40 Cycles

   68℃               30  sec     40 Cycles

   72℃               30  sec     40 Cycles

   72℃                5  min        1 Cycle

质量控制

以下条件有一条不满足时，实验视为无效：

a) 空白对照：无PCR扩增产物条带。

b) 阴性对照：在226bp大小处未见PCR扩增条带。

c)  阳性对照：在226bp大小处可见PCR扩增条带。

结果判断与表述：

A  结果判定

在符合质量控制的情况下，被检样品在226bp大小处可见PCR扩增条带则判为可疑阳性；在226bp大小处未
见PCR扩增条带则判为阴性。

将可疑阳性的PCR扩增产物进行核酸序列测定，与鸡线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ基因相对应片段的序列比对
，其片段大小正确，同源性达到97%以上，则确证含有鸡成分。

B  结果表述

结果为阴性者，表述为“未检出鸡成分”。

结果为可疑阳性者，经测序确证含有鸡成分，表述为“检出鸡成分”；否则，表述为“未检出鸡成分”。