产品编号：SR703

制品内容（25μl反应×50次量）

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2×Premix for PCR *1                   1 ml

Primer Mix for Porcine*2               50μl

dH₂O                                            1 ml

Control DNA for Porcine               50μl

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*1   2×Premix for PCR中含有dNTP、Buffer、Taq酶等。

*2   Primer Mix for Porcine中含有扩增用引物。

保存：-20℃

制品说明

本制品是利用PCR技术快速检测猪线粒体DNA的试剂盒。应用PCR技术，根据线粒体基因上动物种间的多态性的差异
进行猪源性成分鉴定。利用特异性扩增猪源性成分的引物对样品模板DNA进行PCR扩增,并分别在实验中设立阴性对
照和阳性对照反应。制品中2×Premix for PCR已经将DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTP等试剂预混在一起。试剂盒
采用独特的PCR反应用Buffer和DNA聚合酶,可以有效抵制非特异性的PCR扩增，大大提高了PCR的扩增效率。本检测简
单快速，灵敏度高、特异性强。本制品适用于食品和饲料等样品中猪源性成分的鉴别。

实验操作：

A  样品DNA 提取：

1．取样：按采样要求，取8-10g原样品在灭菌研钵中。

2．研磨：加入适量TE溶液，充分研磨样品至微小颗粒状，转移至数个灭菌EP管中。

3．提取核酸：按市售的DNA核酸提取试剂盒的说明方法提取样品总DNA。

B  PCR反应

按下列组份配置PCR反应液。

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2×Premix for PCR                   18μl

Primer Mix for Porcine             1μl

样品DNA  *                                  5μl

dH2O                               up to 25μl

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*  Negative Control 反应时，用dH2O替代样品DNA; Positive Control 反应时，用Control DNA for Porcine
替代样品DNA。

C  凝胶电泳检测试验：

将PCR扩增产物于1.5％琼脂糖凝胶上进行电泳试验。

按下列条件进行PCR反应:

   94℃                2  min        1 Cycle

   94℃               15  sec     40 Cycles

   68℃               30  sec     40 Cycles

   72℃               30  sec     40 Cycles

   72℃                5  min      1  Cycle

质量控制

以下条件有一条不满足时，实验视为无效：

a)       空白对照：无PCR扩增产物条带。

b)       阴性对照：在226bp大小处未见PCR扩增条带。

c)       阳性对照：在226bp大小处可见PCR扩增条带。

结果判断与表述

A  结果判定

在符合质量控制的情况下，被检样品在226bp大小处可见PCR扩增条带则判为可疑阳性；在226bp大小处未见PCR扩
增条带则判为阴性。

将可疑阳性的PCR扩增产物进行核酸序列测定，与猪线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ基因相对应片段的序列比对，其片
段大小正确，同源性达到97%以上，则确证含有猪成分。

B  结果表述

结果为阴性者，表述为“未检出猪成分”。

结果为可疑阳性者，经测序确证含有猪成分，表述为“检出猪成分”；否则，表述为“未检出猪成分”。