驴源性成分DNA Real Time PCR 检测试剂盒

驴源性成分DNA Real Time PCR 检测试剂盒

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产品编号：SR607

制品说明

本制品是利用Real Time PCR技术快速检测驴基因组DNA的试剂盒。采用荧光PCR技术，根据线粒体DNA基因上动物种间的多态性
的差异进行驴源性成分鉴定。应用荧光检测技术，对反应液中含有的荧光染料进行检测，在同一反应管内对驴的基因进行扩增并
通过标记荧光物质（FAM）的特异性探针进行特异性杂交，实现荧光检测。其中对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进
行，防止假阴性结果。制品中2×Premix for qPCR已经将DNA聚合酶、反应用Buffer、dNTP等试剂预混在一起。进行实验时，PCR
反应液的配制十分简单。PCR反应用DNA聚合酶，与精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抵制非特异性的PCR扩
增，大大提高了PCR的扩增效率。本检测无需电泳，安全可靠，简单快速，灵敏度高、特异性强。本制品适用于食品、化妆品和饲
料等样品中驴源性成分的鉴别。

制品内容（20μl反应×50次量）

2×Premix for qPCR*1                                            500 μl

Primer Mix fox Asinine*2                                        100 μl

Probe Mix fox Asinine*3                                          50 μl

dH2O                                                                    1 ml

Control DNA for Asinine                                           50 μl

50×ROX reference dye                                           25 μl

实验操作

1．按下列组份配制PCR反应液。            

2×Premix for qPCR                                          10μl

Primer Mix for Asinine                                       2μl

Probe Mix for Asinine*１                                     1μl

样品DNA *2　　　　　　　　                                   5μl

     50×ROX reference dye                                                                                       0.5μ l

dH2O                                                  up to 20μl

     *1 探针的添加量与使用的Real Time PCR扩增仪有关,添加量 可在1－ 3μl之间进行适当调整。

     *2 Negative Control反应时，用dH2O替代样品DNA；Positive Control反应时，用Control DNA for   

         Asinine替代样品DNA。

     *3 Light Cycler(Roche Diagnostics)仪器,不需要加ROX。

2. 选择(FAM)为发光基团，选择（TAMRA）为淬灭基团，选择  （ROX）清除背景噪音。

3. 按下列条件进行PCR反应：

  94℃　　　　　　　  1　 min        1 Cycle

   94℃　　　　　　　 15　 sec       40 Cycles

   60℃　　　　   30－45    sec*      

   * 使用仪器不同，设定时间不同。

    使用Applied Biosystems公司Real Time PCR扩增仪时必须根据仪器型号设定不同时间。 7700 ／ 

    7900HT设定为30秒,7000 ／ 7300设定为31秒，7500 设定为34秒,7500 Fast设定为28秒。其它食品设

    定时间根据仪器使用说明在20－30 sec范围内进行调整。

4．质量控制

   以下条件有一条不满足时，实验视为无效：

   a)空白对照(Blank Control)：未检出荧光信号。

   b)阴性对照(Negative Control)：未检出荧光信号。

   c)阳性对照(Positive Control)：检测出荧光信号，并呈典型扩增曲线。

5. 结果判定

   对各种实验结果的判定情况说明见下表：  

FAM荧光

结果判定

+

如果同时进行的Negative Control实验和Positive Control实验结果正常，检测实际样品时：

①2个平行样检测结果Ct≥40.0，可以判断样品结果为阴性，报告未检出驴源性成分。

②1个平行样检测结果35.0＜Ct＜40.0并出现典型的扩增曲线，此时应适当增加DNA模板量后重做实时荧光PCR检测。再次检测结果仍然Ct＜40.0并出现典型的扩增曲线，可以判断样品检出驴源性成分，报告检出驴源性成分；再次检测结果Ct≥40.0，可以判断样品未检出驴源性成分，报告未检出驴源性成分。

③2个平行样检测结果Ct≤35.0并出现典型的扩增曲线，此时可以判断样品检出驴源性成分，报告检出驴源性成分。

-

如果同时进行的Negative Control实验和Positive Control实验结果正常,无FAM荧光检出,判定为不含有驴源性成分或含量低于检测界限。